黃尿酸（xanthurenic acid）ELISA試劑盒（競(jìng)爭(zhēng)法）的原理與應(yīng)用是什么？

黃尿酸（xanthurenic acid）ELISA試劑盒（競(jìng)爭(zhēng)法）的原理與應(yīng)用可總結(jié)如下：

一、檢測(cè)原理

采用競(jìng)爭(zhēng)法酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，預(yù)先包被黃尿酸抗原的微孔板中依次加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品及HRP標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)抗原，經(jīng)溫育洗滌后，通過(guò)TMB顯色反應(yīng)（藍(lán)色→黃色）實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。樣本中黃尿酸濃度與顏色深度呈負(fù)相關(guān)，最終通過(guò)測(cè)定450nm處OD值計(jì)算濃度.

二、樣本處理與保存

1. ?樣本類(lèi)型?：支持血清、血漿、唾液、尿液等。

2. ?處理方法?：

• 血清需避免細(xì)胞刺激，3000rpm離心10分鐘分離；

• 其他液體樣本需去除雜質(zhì)后分裝凍存（-20℃或-80℃）。

五、注意事項(xiàng)

1. ?保存條件?：未開(kāi)封試劑盒需避光保存于2-8℃，開(kāi)封后需按組分要求分裝；

2. ?適用性驗(yàn)證?：建議預(yù)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)樣本稀釋比例及檢測(cè)線(xiàn)性范圍；

3. ?檢測(cè)靈敏度?：競(jìng)爭(zhēng)法通常靈敏度為10-50pg/mL，需結(jié)合超靈敏試劑盒（如化學(xué)發(fā)光法）檢測(cè)低濃度樣本。

文獻(xiàn)支持：

The Gut Microbiota-Xanthurenic Acid-Aromatic Hydrocarbon Receptor Axis Mediates the Anticolitic Effects of Trilobatin

影響因子：17.521

結(jié)果判斷 

1. 15分鐘內(nèi)在波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值； 

2. 百分結(jié)合率計(jì)算：設(shè)S0管計(jì)數(shù)為B0，各標(biāo)準(zhǔn)管或樣品管計(jì)數(shù)為B，非特異管計(jì)數(shù)為NSB，則百分結(jié)合率 計(jì)算公式如下：B/B0=(B－NSB)/(B0－NSB)×100%

3. logit計(jì)算:各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)或樣品管的logit值計(jì)算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1－B/B0)

4. 將標(biāo)準(zhǔn)品的OD均值與標(biāo)準(zhǔn)品0點(diǎn)的OD均相除，為標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的百分結(jié)合率，在log-logit坐標(biāo)紙上繪圖。 

5. Log-logit雙對(duì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：坐標(biāo)紙上橫軸從左至右第一個(gè)1-9表示為第一個(gè)10進(jìn)位，第二個(gè)1-9表示 為第二個(gè)10進(jìn)位。第三個(gè)1-9表示為第三個(gè)10進(jìn)位。坐標(biāo)紙縱軸為百分比（1-99），即各標(biāo)準(zhǔn)吸光值的百 分結(jié)合率。取一條通過(guò)各點(diǎn)的直線(xiàn)。要求盡可能多的點(diǎn)在線(xiàn)上，同時(shí)剩余的點(diǎn)均勻分布在直線(xiàn)的兩邊。樣 品也同樣由吸光值計(jì)算百分結(jié)合率，再?gòu)目v軸上的相應(yīng)結(jié)合率找到直線(xiàn)上的點(diǎn)，此點(diǎn)對(duì)應(yīng)的橫坐標(biāo)濃度即 為樣品的濃度，無(wú)須換算。 

6. 人工處理：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫 坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的B/B0為縱坐標(biāo)在logit-log坐標(biāo)紙上畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（理想化時(shí)是一條直線(xiàn)）。根據(jù)待測(cè)樣品 的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的數(shù)值應(yīng)取反對(duì)數(shù)才是最后的濃度 值。 

7.8. 9. 自動(dòng)處理：使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式，由電腦自動(dòng)計(jì)算得出結(jié)果。 敏感度：0.1 PPb。

試劑盒性能 

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值，大于等于 0.9900。

2. 靈敏度：檢測(cè)濃度小于 0.1 PPb。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。